Nem toda água é igual
A água é o principal solvente de muitos experimentos e ensaios biológicos. Dependendo da fonte (torneira, deionizada ou ultrafiltrada), a pureza da água pode diferir significativamente, o que pode levar a diferenças a jusante na confiabilidade e reprodutibilidade dos dados. A pureza da água é particularmente importante para aplicações de espectrofotometria que fazem uso de luz transmitida ou refletida para quantificar e caracterizar biomoléculas como oligonucleotídeos e proteínas que normalmente são suspensas em meios líquidos. A espectrofotometria é uma técnica importante no laboratório para detectar e caracterizar biomoléculas e a purificação da água é uma etapa essencial para gerar dados precisos e reprodutíveis a partir de espectrofotômetros.
Um primer de espectrofotometria
Um espectrofotômetro funciona enviando um feixe de luz de um comprimento de onda específico para uma cubeta contendo a amostra de interesse suspensa em um solvente à base de água. Os espectrofotômetros de transmissão projetam luz através da amostra e os detectores medem o comprimento de onda e a quantidade de luz que passa. Os espectrofotômetros de refletância projetam luz nas amostras e medem a porcentagem que é refletida. Quando a luz transmitida ou refletida aquece um fotodetector, ela é convertida em uma corrente que é amplificada eletronicamente, e valores como absorbância ou concentração são então gerados. As técnicas de espectrofotometria trabalham com diferentes tipos de luz, como ultravioleta, visível e infravermelha, embora esta última seja menos comum.
A espectrofotometria requer água altamente pura
A pureza da água é importante para aplicações de espectrofotometria porque é o principal solvente no qual a biomolécula ou amostra de interesse está sendo dissolvida ou suspensa. A água de má qualidade pode conter contaminantes como bactérias, endotoxinas e proteases. Quando a pureza da água é inconsistente, isso leva a imprecisões e baixa reprodutibilidade em dois níveis. Em primeiro lugar, a luz transmitida ou refletida que passa pelas cubetas difere significativamente entre as diferentes amostras. Em segundo lugar, a presença de contaminantes em diferentes níveis pode levar a vários graus de degradação da amostra. Portanto, a água de alta pureza é importante para a reprodutibilidade em aplicações de espectrofotometria.
O que procurar em sistemas de purificação de água
O objetivo dos sistemas de purificação de água é remover contaminantes da água da torneira, incluindo íons inorgânicos, orgânicos, coloides, gases, bactérias e proteases. Há uma variedade de técnicas de purificação de água para escolher para garantir água de alta qualidade para aplicações de espectrofotometria.
Os métodos de destilação utilizam calor para evaporar a água e coletar o condensado, o que ajuda a remover a maioria dos contaminantes, exceto aqueles com pontos de ebulição mais baixos que a água. O carvão ativado é mais eficaz na remoção de íons cloreto e compostos orgânicos que se ligam preferencialmente ao carbono. A ultrafiltração utiliza membranas com poros de aproximadamente três nm de diâmetro para remover partículas grandes, enquanto a osmose reversa utiliza membranas com poros menores que um nm para remoção mais rigorosa de contaminantes como bactérias que são maiores que o tamanho dos poros da membrana. A radiação ultravioleta é útil para eliminar potenciais organismos vivos, como bactérias. A maioria dos produtos utiliza duas ou mais técnicas para atingir diferentes níveis de pureza da água e são mais eficazes na remoção de diferentes tipos de contaminantes.
O primeiro passo na escolha de um sistema de purificação de água é considerar o requisito de pureza da água. De acordo com o Comitê Nacional de Padrões de Laboratório Clínico, a espectrofotometria e outras aplicações analíticas requerem água Tipo I.
Há uma variedade de produtos de purificação de água no mercado, incluindo o Milli-Q® Ultrapure Water System da MilliporeSigma, o Barnstead System da Thermo Fisher Scientific e o Veolia Purelab® Quest System da ELGA para atender às necessidades do seu laboratório. Para um laboratório com espaço limitado, o espaço físico é uma consideração importante e os produtos que são móveis e não precisam ser montados são mais adequados. A escalabilidade também deve ser considerada, pois o sistema de purificação de água deve ser capaz de atender à demanda de água purificada com uma vazão suficiente. Por exemplo, os produtos da Thermo Fisher podem fornecer vazão de 0,1 L/min (Pacific TII) a 4 L/min (Harvey DI+). Alguns experimentos de espectrofotometria, como imunoensaios para detectar proteínas em amostras de sangue, podem ser sensíveis e, nesse caso, até mesmo água de grau clínico pode ser necessária,
